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    人ELISA試劑盒操作步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2023-11-21  點(diǎn)擊次數(shù): 1003次

    人ELISA試劑盒操作步驟

    1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在一、 二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,然后在一、二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻; 然后從一孔、二孔中各取100ul分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50ul棄掉,再各取50ul分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50ul分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50u,混勻后從第七、第八孔中分別取50ul加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μ,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為240pg/ml,160pg/ml,80pg/ml,40pg/ml,20pg/ml)。

    2. 加樣: 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40ul,然后再加待測(cè)樣品10ul(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

    3. 溫育: 用封板膜封板后置37°℃溫育30分鐘。

    4. 配液: 將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

    5. 洗滌: 小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

    6. 加酶: 每孔加入酶標(biāo)試劑50ul,空白孔除外。

    7. 溫育: 操作同3。

    8. 洗滌: 操作同5。

    9. 顯色: 每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50ul,輕輕震蕩混勻,37°C避光顯色15分鐘.以內(nèi)進(jìn)行。

    10. 終止: 每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

    11. 測(cè)定: 以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

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