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    ELISA試劑盒備案參考評判標準

    發(fā)布時間: 2018-03-29  點擊次數(shù): 1564次

    1、標準曲線
    ELISA試劑盒定量方法:標準曲線至少由5個濃度組成,測定次數(shù)不少于5次,以確定工作濃度范圍和IC50范圍。
    定性方法:工作濃度范圍通過陰性、臨界值濃度和陽性的樣品測定來確定,每個濃度重復(fù)不少于5次,濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有一定的關(guān)系。
    2、檢測限和定量限
    檢測限:20份空白樣品測定均值加3倍標準差。
    定量限:應(yīng)大于標準曲線中zui低濃度點。對于定量方法,應(yīng)對該濃度樣品至少測定6次進行驗證,而不能通過外延法推斷。
    3、臨界值(cut-off值)的確定
    對于有zui高殘留*的藥物,檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測定的均值減去1.64倍標準差,即95%置信限處。
    對于禁用藥物,檢測方法的臨界值為定量限,該值應(yīng)達到*的指標。
    4、精密度和準確度
    ELISA試劑盒對于有zui高殘留*的藥物,添加濃度為MRL及MRL上下各一個濃度;對于禁用藥物,添加濃度為定量限和2倍定量限,每個添加濃度至少測定5個平行樣,并至少進行3批實驗(不同檢測日期,不同標準曲線,不同批次試劑盒)。
    (1)準確度:回收率范圍大于40%或符合相應(yīng)檢測標準的要求。
    (2)精密度:以變異系數(shù)表示。
    批內(nèi)變異系數(shù):每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%,對于禁用藥物小于或等于30%.
    批間變異系數(shù):所有樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%,對于禁用藥物小于或等于40%.
    定性方法:陰性和陽性樣品各測定不少于50份,確定假陽性率和假陰性率。
    5、交叉反應(yīng)
    試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或共同存在的藥物測定交叉反應(yīng)率。
    6、保存期
    保存期通過保存條件的穩(wěn)定性試驗結(jié)果確定。
    7、ELISA試劑盒復(fù)核試驗
    復(fù)核試驗主要內(nèi)容應(yīng)包括:
    (1)定量方法:檢測限、IC50以及至少兩個添加濃度的準確度和精密度,并與理化方法(或與具代表性進口試劑盒)比較。
    (2)定性方法:檢測限、假陽性率和假陰性率。

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